許多研究表明，自然環(huán)境中很多物理、化學(xué)和生物因素都可以使癌基因激活，而這些變化又可以在癌癥的演進(jìn)過程中得到發(fā)展。上述3種因素所致細(xì)胞突變可以探究到DNA分子-基因水平。所有致癌因素最終一定要改變細(xì)胞的遺傳物質(zhì)才能發(fā)生致癌效應(yīng)，鼻部惡性腫瘤也不例外。材料與方法一、臨床資料、儀器及試劑：共收集鼻腔鼻竇鱗癌24例，男性13例，女性11例，年齡35～70歲，病史1～3年。鼻腔鼻竇良性腫瘤15例(包括鼻腔血管瘤5例、上頜竇囊腫2例及臨床稱為癌前期病變的鼻內(nèi)翻性乳頭狀瘤8例)，鼻腔正常組織5例；良性腫瘤組中男性11例，女性9例，年齡18～59歲。所有病變標(biāo)本均取自術(shù)中或組織活檢，且經(jīng)過病理學(xué)診斷，正常鼻腔組織取自健康自愿提供者。二、方法：(一)組織DNA的提?。翰捎玫鞍酌窴消化，酚/氯仿異戊醇抽提，乙醇沉淀法。100mg新鮮組織，0℃條件下5mL勻漿緩沖液(100mmol/LTrils,10mmol/LEDTA,pH7.4)中制備組織勻漿，然后加入等體積消化緩沖液(20mmol/LNaCl,20mmol/LTrils,20mmol/LEDTA,pH7.4,含200μg蛋白酶K/mL和0.2%SDS)，置37℃水浴消化3h，然后加入等體積的水飽和酚的1/2體積氯仿異戊醇(2.4∶1)抽提2次，再用等體積的氯仿異戊醇提取1次，抽水相，無水乙醇沉淀后置于TE液體中。(二)C-mycDNA探針的制備：擴(kuò)增克隆轉(zhuǎn)化菌，大量制備重組質(zhì)粒，內(nèi)切酶消化，凝膠電泳分離DNA片段，純化后經(jīng)缺口轉(zhuǎn)化法，用［α-32P］dATP標(biāo)記。(三)DotblotDNA雜交：參照ConradG雜交法［1］，每份標(biāo)本DNA取3μg，依次以15倍稀釋成5個(gè)濃度，分別點(diǎn)膜。對(duì)照組采用全基因質(zhì)粒，取1μg依次以15倍稀釋成5個(gè)濃度點(diǎn)膜，室溫風(fēng)干，80℃烤2h。將已結(jié)合DNA的硝酸纖維放入可封口的耐熱塑料袋中進(jìn)行預(yù)雜交、雜交、放射自顯影和激光掃描。結(jié)果B1-B7，C1-C5，D1-D5，E5，E7，F(xiàn)7，G2-G5共24例為鼻腔鼻竇鱗癌的標(biāo)本，屬c-myc高倍擴(kuò)增組，擴(kuò)增倍數(shù)為10～40倍；A6，A7，C6，C7，E1-E4，E6，F(xiàn)5-F6，G1，G6，G7共15例為鼻腔鼻竇良性腫瘤組，擴(kuò)增倍數(shù)10倍以下。其中8例鼻內(nèi)翻性乳頭狀瘤(臨床上屬癌前期病變)c-myc的擴(kuò)增倍數(shù)為5～10倍。鼻腔血管瘤和上頜竇囊腫的c-myc擴(kuò)增倍數(shù)為5倍以下。D6，F(xiàn)1-F4共5例為鼻腔正常組織的擴(kuò)增倍數(shù)為5倍以下。見圖1，2。