對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病的療效最好，緩解率在50％以上，緩解期為1～9月。對(duì)急性粒細(xì)胞型白血病和急性單核細(xì)胞白血病也有一定療效。對(duì)惡性淋巴瘤也有較好的療效。其優(yōu)點(diǎn)是對(duì)于常用藥物治療后復(fù)發(fā)的病例也有效，缺點(diǎn)是單獨(dú)應(yīng)用不但緩解期短，而且很易產(chǎn)生耐受性，故目前大多與其他藥物合并應(yīng)用。
      

      AmpC酶是一類(lèi)既可由染色體介導(dǎo)，又可由質(zhì)粒介導(dǎo)的頭孢菌素酶，它與質(zhì)粒介導(dǎo)的超廣譜p內(nèi)酰胺酶(ESBLs)是導(dǎo)致革蘭陰性桿菌耐藥的最重要的兩類(lèi)酶。[/b]ESBLs的檢測(cè)方法有多種，并日趨成熟，而檢測(cè)AmpC酶缺乏足夠的流行病學(xué)資料，尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的方法。本研究采用酶提取物三維試驗(yàn)、頭孢西丁三相試驗(yàn)及氯唑西林雙紙片協(xié)同法同時(shí)檢測(cè)陰溝腸桿菌和鮑曼不動(dòng)桿菌的AmpC酶，并加以比較，以找出一種適合臨床常規(guī)應(yīng)用的檢測(cè)AmpC酶的方法。同時(shí)了解本院臨床分離的菌株AmpC酶的流行情況。一、材料與方法1、菌株：75株陰溝腸桿菌和55株鮑曼不動(dòng)桿菌為本院臨床分離菌株，質(zhì)控菌株陰溝腸桿菌029M和1194E由中國(guó)施貴寶公司惠贈(zèng)，分別作為AmpC酶陽(yáng)性和陰性對(duì)照。2、儀器與試劑：M-H瓊脂由杭州天和微生物試劑公司提供，胰胨肉湯為Difco公司產(chǎn)品。VITEK自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀，低溫離心機(jī)，恒溫?fù)u床，-80℃冰箱，恒溫孵育箱。頭孢噻肟、頭孢他啶、氨曲南、頭孢曲松、頭孢哌酮、頭孢西丁購(gòu)自杭州天和微生物試劑公司；頭孢吡肟為英國(guó)OXOID公司產(chǎn)品。3、酶提取物三維試驗(yàn)：參考文獻(xiàn)[2]操作，挑取血平板上過(guò)夜培養(yǎng)的數(shù)個(gè)待測(cè)菌落，加入12ml胰胨肉湯，置350(2恒溫?fù)u床上(200r／min)孵育4-6h，4℃4000r／min離心25min，取沉淀置-80℃反復(fù)凍融5次。加入1.5m10.01mol／LPBS(pH7.4)旋渦混勻，4℃9000r/min離心1h，取上清液，即為酶提取物。將0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊拇竽c埃希菌ATCC25922菌液密涂于M-H瓊脂平板，稍干后在乎板中心貼一30ug／片的頭孢西丁紙片。用無(wú)菌刀片在離紙片邊緣5mm處放射狀切1條狹縫，取25ul酶提取物加入狹縫內(nèi)，待酶液稍干后置35℃孵箱過(guò)夜。若在狹縫與抑菌環(huán)的交界處出現(xiàn)擴(kuò)大的長(zhǎng)菌區(qū)域，判為AmpC酶陽(yáng)性。4、頭孢西丁三相試驗(yàn)：參考文獻(xiàn)操作，將大腸埃希菌ATCC25922制成0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊木鷳乙?，均勻涂布于M-H瓊脂平板，稍干后取一30ug／片頭孢西丁紙片貼在乎板中心。將35mm的無(wú)菌刀片的刀口均勻地沾上待測(cè)菌，在離紙片3mm處與紙片直徑平行垂直插入瓊脂，再輕輕拔出刀片。置35℃孵箱過(guò)夜。若割切線附近的抑菌環(huán)縮小或變形，為頭孢西丁三相試驗(yàn)陽(yáng)性，反之為陰性。5、氯唑西林雙紙片協(xié)同法：參考文獻(xiàn)操作，將0.5麥?zhǔn)蠞岫鹊拇郎y(cè)菌液均勻涂布于M-H瓊脂平板。稍干后，在乎板中心貼一空白紙片，再在離中心。18mm到25mm處貼上頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢哌酮、頭孢噻肟、氨曲南及頭孢吡肟6種藥敏紙片，于空白紙片上加氯唑西林溶液20ul，置35℃孵箱過(guò)夜。以氯唑西林與任何一種頭孢菌素協(xié)同為陽(yáng)陛。二、結(jié)果1.3種方法檢測(cè)陰溝腸桿菌和鮑曼不動(dòng)桿菌產(chǎn)AmpC酶的情況。結(jié)果表明，用頭孢西丁三相試驗(yàn)檢測(cè)AmpC酶，存在相當(dāng)高的假陽(yáng)性率，尤其對(duì)陰溝腸桿菌產(chǎn)AmpC酶的檢測(cè)假陽(yáng)性率達(dá)61.1％(33／54)；而同時(shí)使用多種底物，采用氯唑西林雙紙片協(xié)同法，對(duì)兩種細(xì)菌的AmpC酶檢測(cè)效果均較好，與酶提取物三維試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的總符合率達(dá)94.6％。2、本院臨床分離陰溝腸桿菌AmpC酶檢出率為29.3％，與文獻(xiàn)報(bào)道相近，檢出率達(dá)18.2％。三、討論AmpC酶可導(dǎo)致嚴(yán)重的耐藥問(wèn)題，但目前尚缺乏適用于臨床微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用的檢測(cè)方法。酶提取物三維試驗(yàn)雖然作為公認(rèn)的AmpC酶檢測(cè)方法[2]，具有準(zhǔn)確度高、結(jié)果清晰并容易判讀的特點(diǎn)，但需反復(fù)凍溶菌液，操作繁瑣費(fèi)時(shí)。頭孢西丁三相試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便、結(jié)果易判讀，但假陽(yáng)性率高，可能與細(xì)菌膜孔蛋白缺失導(dǎo)致其對(duì)頭孢西丁耐藥有關(guān)，故該方法只能作為AmpC酶的篩選試驗(yàn)，尚需其他方法進(jìn)一步確證。本試驗(yàn)結(jié)果中出現(xiàn)1株酶提取物三維試驗(yàn)陽(yáng)性，頭孢西丁三相試驗(yàn)陰性的菌株，造成這一現(xiàn)象的原因還有待進(jìn)一步研究。氯唑西林雙紙片協(xié)同法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果容易判讀，與三維試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果符合率高，可作為臨床微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)AmpC酶的常規(guī)方法。但雙紙片協(xié)同試驗(yàn)操作中應(yīng)注意幾點(diǎn)：(1)氯唑西林的擴(kuò)散性較差，試驗(yàn)時(shí)應(yīng)將菌液直接加到空白紙片上；(2)底物與中心紙片的距離要根據(jù)頭孢菌素的抑菌環(huán)直徑進(jìn)行調(diào)整；(3)同時(shí)選用多種底物，有利于提高檢測(cè)的靈敏度。醫(yī)療器械商務(wù)網(wǎng)醫(yī)療信息醫(yī)療廠商醫(yī)療醫(yī)械器械信息器械廠商器械